INTRODUCCIÓN

Las larvas de trematodos, también denominadas cercarias, son organismos de vida libre que emergen de moluscos acuáticos, generalmente en gran cantidad, formando parte del zooplancton. Durante su evolución, diversas adaptaciones biológicas fueron surgiendo para potenciar al máximo el encuentro de las cercarias con sus respectivos huéspedes. Entre estas adaptaciones están la gran replicación de estos organismos dentro de los moluscos, la liberación sincronizada de cercarias en momentos que favorezcan el encuentro con sus huéspedes definitivos y el desarrollo de respuestas a las propiedades físicas, químicas y ambientales en asociación con la presencia de estos huéspedes^1,2,3,4.

Los ciclos de vida de trematodos digenéticos son complejos, con dos etapas principales: la reproducción sexuada en los huéspedes definitivos (en su mayoría vertebrados); y la reproducción asexuada en huéspedes intermedios (principalmente gastrópodos acuáticos)⁵. Estas larvas se forman durante la etapa de reproducción asexuada, a través de la formación de redias y/o esporocistos, por un proceso denominado de poliembrionía^2,6.

Se han descrito y caracterizado diversos tipos y formas larvales de trematodos originarios de diferentes especies de moluscos de agua dulce en Brasil, por distintos autores^7,8,9,10,11, principalmente en los estados de las Regiones Sur y Sudeste^{12,13,14,15,16}. De estos moluscos, se destaca el caracol del género Biomphalaria, que actúa como huésped intermediario del Schistosoma mansoni, agente etiológico de la esquistosomiasis mansónica, además de albergar otros tipos de larvas emergentes¹⁷.

Sin embargo, diferentes cercarias, ya identificadas actualmente, presentan importancia médica y veterinaria, y pueden transmitir dos grupos de enfermedades: las que se transmiten a través de la penetración directa en la piel, como la esquistosomiasis¹⁸; y las que se transmiten por el consumo de agua y alimentos crudos o mal cocidos que contienen estos parásitos, como la clonorquiasis, la heterofiasis y la paragonimiasis^19,20.

Para la región de la Amazonía Legal brasileña, se han realizado pocos estudios intentando conocer la biodiversidad de las larvas de los trematodos, a ejemplo de la investigación realizada por Cantanhede et al.²¹. Esta área abarca los estados de la Región Norte, además de los estados de Mato Grosso y Maranhão, al oeste del Meridiano 44²²; y tiene una inmensa variedad biológica de especies, ecosistemas y recursos energéticos²³.

En la parte oriental de esta región, donde está localizado el estado de Maranhão, se encuentran algunos biomas, como los campos inundados de la Baixada Ocidental y el Litoral Norte del Estado, que, debido a sus aspectos sociales, naturales y geomorfológicos, favorecen el mantenimiento y la abundancia de moluscos libélicos, lo que consecuentemente aumenta las posibilidades de

convertirse en potenciales huéspedes de trematodos digenéticos²⁴. Siendo así, la riqueza taxonómica de larvas de helmintos parásitos, en la región, se encuentra subestimada. De este modo, el objetivo fue de realizar un estudio de la biodiversidad de larvas de trematodos eliminadas por los caracoles Biomphalaria spp., obtenidos de criaderos naturales de dos localidades de Maranhão, en la Amazonía Legal, Brasil.

MATERIALES Y MÉTODOS

El presente estudio fue realizado durante el período de febrero de 2015 a enero de 2016 en dos municipios del estado de Maranhão que pertenecen a la porción oriental de la Amazonía Legal brasileña: São Bento y São Luís. El municipio de São Bento (2°40'00"S y 44°43"O) está ubicado en la microrregión de la Baixada Ocidental maranhense y mesorregión Norte maranhense, con un área de 585,3 km² y ambiente caracterizado por campos naturalmente inundados y clima tropical húmedo, destacándose dos estaciones climáticas: una lluviosa, entre enero y julio; y otra seca, entre agosto y diciembre²⁵. El municipio de São Luís (2º31'LS y 44º18'LO) está ubicado entre las bahías de São Marcos y São José de Ribamar, posee un área de 822,1 km² y presenta clima tropical cálido y húmedo, con dos estaciones: la lluviosa (enero a junio) y la de estiaje (julio a diciembre)²⁶ (Figura 1). Ambos municipios presentan barrios periféricos con condiciones precarias de vida, entre las que se destacan la falta de saneamiento básico, la gran concentración poblacional y la presencia de colecciones hídricas conteniendo un elevado número de caracoles Biomphalaria spp.²⁷.

Fuente: Adaptado de IBGE, 2010¹⁹.

Figura 1 - Localización del área de estudio, estado de Maranhão, porción este de la Amazonía Legal brasileña, con destaque para los dos municipios en donde se realizaron las recolecciones 

La recolección de los moluscos se realizó bimestralmente, durante 30 minutos, en tres puntos (área de 15 a 20 m) distintos en cada municipio, com ayuda de conchas de captura apropiadas y pinzas metálicas. La elección de los puntos de recolección se hizo para obtener una mayor diversidad de ambientes que podrían funcionar como criaderos. Las coordenadas geográficas se obtuvieron a través del sistema de posicionamiento global (global positioning system - GPS). Los moluscos recolectados fueron almacenados en recipientes plásticos, que se etiquetaron y condujeron al Laboratorio de Parasitología Humana de la Universidad Estatal de Maranhão (UEMA), donde fueron mantenidos en acuarios de vidrio con agua declorada y alimentados adecuadamente con hojas de lechuga, según lo que preconiza Malek²⁸. Aproximadamente el 10% de los ejemplares vivos fueron sacrificados en agua a 70° C, para posibilitar la retirada de las partes blandas, que se fijaron en solución de Railliet-Henry, y posteriormente disecadas bajo estereomicroscopio. Para la identificación de las especies, se consideraron parámetros conquiliológicos y morfológicos internos^29,30.

Para constatar la eliminación de las larvas de trematodos, los moluscos fueron individualmente colocados en recipientes de vidrio, con cerca de 5 mL de agua declorada, y expuestos a la luz y al calor de tres lámparas incandescentes (de 60 W) durante 4 h³¹. Para la exposición a oscuridad, se dejaron dentro de una caja de poliestireno expandido sin tapa, sin luz ni calor durante 12 h y, enseguida, analizados en lupa microscópica. Los moluscos negativos al test fueron expuestos a los mismos procedimientos semanalmente, durante 30 días.

Las larvas encontradas se recolectaron con el auxilio de micropipeta y se utilizaron para la confección de preparaciones a fresco, que fueron teñidas con solución de lugol diluida y colorantes vitales³¹, enseguida, montadas bajo lámina y lamínula. Luego, se llevaron al microscopio óptico para caracterización e identificación morfológica, según claves de identificación taxonómicas de diferentes autores^{5,32,33,34,35,36}. Todas las recolecciones fueron autorizadas por el Instituto Chico Mendes de Conservación de la Biodiversidad, a través del Sistema de Autorización e Información em Biodiversidad, de acuerdo al permiso n° 40025/1 y con el registro n^o 54354, válidos para el período de 2015/2016.

RESULTADOS

Se recolectaron moluscos en tres puntos de cada municipio, registrándose las siguientes coordenadas geográficas para São Luís: P1 (Barrio Tirirical - 2º33'32.5"S 44º12'54.9"O), caracterizado por la presencia de alteraciones antrópicas visibles, como sedimentación, desechos urbanos y retirada de monte ribereño (Figura 2A); P2 (Barrio Aurora - 2º34'09.0"S 44º13'24.5"O), que presenta características ambientales más conservadas, como la presencia de vegetación ribereña del tipo secundario, ausencia de erosión en los márgenes y de sedimentación, además de contaminación de tipo urbano poco evidente, (Figura 2B); y P3 (Barrio Sá Viana - 2º32'47.5"S 44º14'06.9"O), local con un acentuado aglomerado urbano, con la presencia de gran cantidad de residuos domésticos (Figura 2C). En São Bento: P1 (Porto Grande - 2º42'0 "S 44º49'13"O), ubicado a orillas de uno de los grandes lagos naturalmente inundables del Municipio, pero donde, debido a la proximidad de casas en los alrededores, el vaciado de alcantarillado doméstico era evidente, así como la presencia de residuos urbanos diversos (Figura 3A); P2 (Outra Banda - 2º41'42"S 44º49'24"O), un terreno baldío caracterizado por la presencia moderada de residuos domésticos, bien como la presencia de gran cantidad de habitaciones próximas (Figura 3B); y P3 (Aeroporto - 2º42'17"S 44º50'30"O), que presentó características ambientales visualmente conservadas (Figura 3C).

A: Punto 1 - Barrio Tirirical; B: Punto 2 - Barrio Aurora; C: Punto 3 - Barrio Sá Viana.

Figura 2 - Puntos de recolección en los criaderos naturales de Biomphalaria spp. del municipio de São Luís, estado de Maranhão, Brasil 

A: Punto 1 - Barrio Porto Grande; B: Punto 2 - Barrio Outra Banda; C: Punto 3 - Barrio Aeroporto.

Figura 3 - Puntos de recolección en los criaderos naturales de Biomphalaria spp. del municipio de São Bento, estado de Maranhão, Brasil 

En São Luís, se recogió un total de 2.661 moluscos, que estaban distribuidos en los puntos de recolección de la siguiente forma: P1, 432 (16,23%); P2, 172 (6,46%); y P3, 2.057 (77,31%). En el municipio de São Bento, 1.726 se capturaron y registraron moluscos como sigue: P1, 326 (18,89%); P2, 1.214 (70,33%); y P3, 186 (10,78%). En ambos municipios, se encontraron ejemplares de dos especies de Biomphalaria (Biomphalaria straminea y Biomphalaria glabrata).

La positividad de estos moluscos para larvas de trematodos, en São Luís, fue en 99/2.661 (3,72%) ejemplares, con porcentajes específicos en los criaderos: P1, 31/432 (7,17%), P2, 7/172 (7,17%), 4,07%) y P3, 61/2.057 (2,96%). En São Bento, con 84/1.726 (4,87%) ejemplares, distribuidos en porcentajes específicos: P1, 29/326 (8,89%) y P2, 55/1.214 (4,53%); en P3 no hubo moluscos positivos en esa localidad. Tampoco se observaron casos de coinfección entre diferentes larvas de temblones en los moluscos de los Municipios.

La helmintofauna de la región fue representada por seis familias de larvas de trematodos: Clinostomidae, Diplostomidae, Echinostomatidae, Schistosomatidae, Spirorchiidae y Strigeidae. En São Luís, se registraron todas esas, pero en São Bento no se obtuvo el registro de las familias Clinostomidae e Diplostomidae (Figura 4). Destacándose además que las cercarias de la familia Schistosomatidae identificadas en São Luís en el P3 y en São Bento en P1 y P2 eran todas de la especie S. mansoni, lo que se constituye en una realidad preocupante para la población, por tratarse de locales próximos a casas de habitación.

SL: São Luís; SB: São Bento; Señal convencional utilizada: - Dato numérico igual a cero, no resultante de redondeo.

Figura 4 - Porcentual de moluscos positivos para seis familias de larvas de trematodos encontradas en los municipios de São Luís y São Bento, estado de Maranhão, Brasil, durante el período de febrero de 2015 a enero de 2016 

Las larvas de trematodos, en São Luís, se eliminaron con un porcentual de 1,95% (52/2.661) de B. straminea y 1,76% (47/2.661) de B. glabrata. Por su parte, en São Bento, se eliminaron con porcentual de 4,46% (77/1.726) de B. glabrata y 0,40% (7/1.726) de B. straminea (Tabla 1). Todas las formas larvales de trematodos identificadas en este estudio, con excepción de la cercaria de S. mansoni, se consideran primeros registros para el municipio de São Luís, mientras que, para el municipio de São Bento, se obtuvo el primer relato para la familia Strigeidae.

DISCUSIÓN

Los Puntos que presentaron mayor cantidad de caracoles recolectados y mayor índice positivo para algún tipo de cercaria, tanto en São Luís como en São Bento, fueron los Puntos (P3 y P2, respectivamente) ubicados cerca de las residencias, siendo encontrados caracoles incluso en zanjas y aguas de las veredas de hormigón (criadero artificial). La elevada abundancia de caracoles en estos locales puede estar correlacionada con su preferencia por los hábitat antropogénicos, ricos en materia orgánica^37,38. Mientras que los criaderos que presentaron baja abundancia de caracoles, puede deberse a factores como la presencia de sustratos sujetos a modificaciones - por ejemplo, fuerte corriente, evidenciada en P2 (São Luís) y P3 (São Bento) - teniendo, de esta forma, baja disponibilidad de materia orgánica, lo que probablemente estaría interfiriendo en la oferta de alimento y, consecuentemente, en una menor colonización del criadero³⁹.

En São Luís, hubo mayor porcentual de moluscos eliminando cercarias de las familias Echinostomatidae (0,90%), Strigeidae (0,71%) y Schistosomatidae (0,71%), esta última representada solamente por cercarias causantes de la enfermedad esquistosomiasis mansónica. Estas cercarias se encontraron solamente en P3, que estaba localizado en un Barrio periférico de la zona urbana de São Luís. En el mismo local, Oliveira et al.⁴⁰ realizaron una encuesta malacológica y detectaron seis planorbídeos contaminados por el parásito, relatando la presencia de esta parasitosis en el área.

En P3 de São Luís, se constató una mayor biodiversidad de larvas, siendo encontrados cuatro tipos distintos. Según Hudson et al.⁴¹ y Minguez et al.⁴², esa elevada diversidad y abundancia de trematodos en moluscos puede estar relacionada a la presencia de varios otros taxones de vertebrados necesarios para la manutención de los respectivos ciclos biológicos heteróxenos de diversos parásitos, indicando una condición ambiental favorable en relación al funcionamiento trófico. Tal condición ambiental fue observada en el referido Punto de recolección, lo que probablemente confirma esa hipótesis.

En São Bento, hubo mayor Porcentual de caracoles eliminando cercarias de las familias Echinostomatidae (1,80%) y Spirorchiidae (1,56%). Para el P2 de ese municipio, se verificó una mayor cantidad de eliminación de esas cercarias por los moluscos. De estos planorbídeos, el 0,75% (13/1.726) se encontraba positivo para S. mansoni (Schistosomatidae), notificando también la presencia de la esquistosomiasis mansoni en esa localidad. Para este municipio, Cantanhede et al.²¹ verificaron la biodiversidad de moluscos y de larvas de trematodos, encontrando 0,22% (1/444) de B. glabrata eliminando cercarias de S. mansoni. Se confirmó, así como en San Luis, la presencia de ese parásito.

Las tasas de eliminación de cercarias de S. mansoni por moluscos Biomphalaria spp., verificadas en esta investigación para P1 y P2 de São Bento, considerada un área endémica para a esquistosomiasis^24,43, no fueron elevadas cuando comparadas a las tasas de eliminación de esas mismas cercarias por los moluscos de P3 en São Luís. Eso puede estar relacionado a la elevada presencia de larvas de la familia Echinostomatidae, eliminadas por moluscos de esos Puntos en São Bento, ya que, según algunos autores^{44,45,46,47,48}, cercarias de esa familia pueden interferir negativamente en el ciclo biológico de las formas larvales de S. mansoni, provocando alteraciones fisiológicas en los moluscos vectores que, posiblemente, impiden la instalación y evolución del miracídio, manteniendo así, una relación de antagonismo directo y/o indirecto con el mismo.

Sin embargo, como la enfermedad fue constatada desde 1920 en el municipio de São Bento, según Alvim⁴³, la baja aparición del parasito puede estar relacionada a la mayoría de la población viviendo con bajos niveles de parasitismo, debido a sucesivas reinfecciones, no presentando, así, una cantidad suficiente de huevos eliminados en las heces, lo que podría disminuir la probabilidad de infección de los caracoles.

En los estudios de Souza et al.¹⁶ y Pinto y Melo⁵, las cercarias Strigeidae, Clinostomidae, Echinostomatidae y Spirorchiidae fueron eliminadas de hasta tres especies de Biomphalaria (B. glabrata, B. straminea y Biomphalaria tenagophila). Ya en los estudios de Silva y Melo⁴⁹, Strigeidae y Diplostomidae fueron eliminadas de B. glabrata y B. tenagophila. En otras recopilaciones y estudios, Schistosomatidae, Strigeidae y Diplostomatidae fueron eliminadas solamente de B. glabrata^13,50; y Echinostomatidae y Strigeidae, de B. tenagophila^17,51.

CONCLUSIÓN

La porción oriental de la Amazonía Legal brasileña, representada en este estudio por los municipios maranhenses, São Bento y São Luís, presentó una elevada biodiversidad de larvas de trematodos, siendo los criaderos naturales que contenían más cantidad de caracoles infectados fueron los más próximos de las casas. No hubo diferencias en la diversidad de las familias de trematodos eliminadas entre las dos especies de Biomphalaria identificadas en la región. En esta investigación, se relataron los primeros registros de diferentes cercarias para ambos municipios. De esa manera, mayores esfuerzos para ampliar el conocimiento sobre esas formas evolutivas de trematodos digenéticos en la Región Amazónica deben ser realizados.