INTRODCCIÓN

Triatoma pintodiasi Jurberg, Cunha & Rocha, 2013 (Hemiptera, Reduviidae, Triatominae) es una especie críptica del subcomplejo Triatoma rubrovaria que presenta gran semejanza morfológica con la Triatoma circummaculata (Stål, 1859). Sus principales diferencias, en relación a la T. circummaculata y a la Triatoma carcavalloi Jurberg, Rocha & Lent, 1998, están en la pigmentación del lóbulo posterior del pronoto, en la morfología de la genitalia del macho, en las proporciones morfométricas de la cabeza y en la dosis de proteínas presentes en la hemolinfa¹. Esas tres especies neotropicales son simpátricas, y pueden ser encontradas viviendo en rocas y pedregales en el estado de Rio Grande do Sul, Brasil, y raramente observadas en el intra y peridomicilio, y, hasta el momento, solamente la T. circummaculata fue hallada naturalmente infectada por el Trypanosoma cruzi^1,2.

En el proceso de identificación y clasificación de estos vectores de la enfermedad de Chagas, el conocimiento taxonómico adecuado es fundamental para la delimitación interespecífica de las especies. Debido al proceso continuo de especiación, existen dificultades o incluso, impedimentos para la delimitación de ciertos taxones^3,4 y, por lo tanto, se han incorporado algunas herramientas en la taxonomía morfológica clásica, para ayudar a identificar caracteres que servirán como parámetros para la correcta delineación de una especie. Entre los enfoques, se puede citar el estudio comparativo de la morfología de los genitales de los machos y las técnicas bioquímicas, moleculares y estadísticas ^1,5,6,7. En este contexto, la microscopía electrónica de barrido (MEB) se ha convertido en un gran aliado de la taxonomía en el estudio de la Triatominae debido a su efectividad, demostrando excelentes resultados a través del análisis estructural de una superficie, dándole mayor resolución, permitiendo observar estructuras que no pueden observarse bajo microscopía óptica y, por lo tanto, ayudan en la descripción de nuevas especies y estudios taxonómicos^8,9,10,11,12.

Un análisis morfológico comparativo, elaborado por Barata¹³, detalló las características macroscópicas y exocoriales de 10 especies del género Rhodnius Stål, 1859, observadas a través de la técnica de MEB, posibilitando organizar una clave para las mismas. Los resultados de tal estudio corroboraron las tesis de Pinto¹⁴ y de Galliard¹⁵, entre los primeros a establecer que la ornamentación del exocorion de los huevos de triatóminos podría usarse en la identificación de algunas especies.

Con el objetivo de ampliar el conocimiento y la caracterización de la especie T. pintodiasi, la morfología de los huevos se describió utilizando las técnicas de microscopía óptica y de MEB, incluyendo la caracterización de su perfil morfométrico y la comparación de su configuración exocorial con la T. circummaculata.

MATERIALES Y MÉTODOS

Cinco machos y siete hembras fueron separados para la formación de colonia y la consecuente obtención de huevos. Estos especímenes provenían de colonias del insectario existente en el Laboratorio Nacional e Internacional de Referencia de Taxonomía de Triatóminos del Instituto Oswaldo Cruz (COI), Fundación Oswaldo Cruz (Fiocruz), y provenían de recolección en Rio Grande do Sul, Rincão dos Ventura en la ciudad de Santa Maria. Las colonias se mantuvieron en cristalizadores de vidrio, con soporte de madera y papel de filtro en el interior para aumentar la superficie de contacto y disminuir la humedad. La temperatura y la humedad se registraron dos veces al día (mañana y tarde).

Para la microscopía óptica, se seleccionaron 12 huevos inmediatamente después de la puesta, que se observaron a través de lupa estereoscópica ZEISS STEMI SV 11, para visualizar las estructuras y la comparación de las mediciones. Para la morfometría, utilizamos una escala en lámina micrométrica, que luego se procesó en el software Microsoft Office Excel 2007 para obtener el promedio y el desvío estándar (DE). Para el análisis estructural, se seleccionaron 10 huevos limpios, fijados en cinta adhesiva doble cara en stubs metálicos, luego metalizados con oro y llevados al MEB modelo JEOL JSM - 6390LV para la selección de áreas y observación de sus estructuras. Para minimizar la fracción de errores en el conteo y medición de las estructuras, el cuerpo del huevo se dividió en tres áreas (Figura 1A) con recuento de perforaciones en tres células en cada área.

Todo el material citado en los resultados está depositado en la Colección Herman Lent (IOC/Fiocruz).

A: División del exocorion - (a) primer tercio, (b) segundo tercio, (c) tercio final; B: Visión general del huevo - (ex) exocorion, (op) opérculo.

Figura 1 - Cuerpo del huevo de T. pintodiasi Jurberg, Cunha & Rocha, 2013 

RESULTADOS

MICROSCOPÍA ELECTRÓNICA DE BARRIDO

Cuerpo con exocorion (Figura 1 B) en el primer tercio de la extensión del huevo, presentando células poligonales, con variación de pentagonales a hexagonales. Estas aparecieron, en su mayoría, poco delimitadas cuando próximas del borde (Figura 2) y con ausencia de cuello. En el segundo tercio del huevo, la arquitectura exocorial disponía de células pentagonales y hexagonales (Figura 3 A). Las células del cuerpo presentaban perforaciones esparcidas, variando entre 21-35 orificios en cada célula (Figura 3 B). Opérculo (Figura 1 B) del tipo verdadero, levemente prominente, formado por células poligonales convexas (Figura 4 A), en su mayoría hexagonales, con perforaciones distribuidas por todas las células y líneas limitantes bien aparentes con aspecto de surco (Figura 4 A). Opérculo anexo al borde del huevo, con evidente hendidura en la unión (Figura 4 B). Borde con formato regular en toda su extensión (Figura 5 B), presencia de aerópilas (Figura 5 A) y micrópilas (Figura 5 B) en todo su contorno.

Línea limitante pierde distinción a medida que se aproxima del borde: (a) Línea limitante poco distinguible; (b) Línea limitante bien distinguible

Figura 2 - T. pintodiasi Jurberg, Cunha & Rocha, 2013: células próximas al borde del huevo en su primer tercio 

A: Ultraestructura de las células en el segundo tercio de la extensión del huevo; B: Estructura del exocorion del último tercio del cuerpo del huevo formada por células poligonales y perforaciones aparentes en las células hexagonales.

Figura 3 - Células del segundo y del último tercio del huevo de T. pintodiasi Jurberg, Cunha & Rocha, 2013 

A: Opérculo con células poligonales de aspecto convexo y levemente prominentes, mostrando perforaciones en algunas células; B: Opérculo anexo al borde del huevo, con evidente fisura en la unión.

Figura 4 - Opérculo de T. pintodiasi Jurberg, Cunha & Rocha, 2013 

A: Borde del huevo con presencia de aerópilas; B: Borde del huevo con formato regular en toda su extensión y, en destaque, las micrópilas bien aparentes en el borde del huevo.

Figura 5 - Borde del huevo de T. pintodiasi Jurberg, Cunha & Rocha, 2013 

Al comparar las características obtenidas por el MEB de los huevos de T. pintodiasi con las discriminadas por Rosa et al.¹⁶ y Cardozo-de-Almeida et al.¹¹ para T. circummaculata, fue posible destacar las similitudes encontradas en la configuración exocorial de las células del opérculo, junto con las del cuerpo del huevo, destacando la no especificidad en la cantidad de perforaciones presentes en las células, enfatizando que esta es la primera descripción morfológica por el uso de MEB y morfométrica para huevos de T. pintodiasi.

La observación de estructuras características, como las aerópilas y micrópilas, alrededor del borde, mostró que están distribuidas uniformemente, con una fisura en la unión del opérculo y el borde del huevo. También se observó la ausencia de cuello y collar.

DISCUSIÓN

Desde que Galliard, en 1935, demostró la importancia de las estructuras exocoriales, por que varían de especie para especie, los especialistas en triatóminos tuvieron acceso a una nueva herramienta en la lista de los elementos a ser analizados para caracterizar una especie. De esa forma, fue posible ampliar el concepto específico y aumentar las condiciones de control de esos vectores del Mal de Chagas que tienen ciclos biológicos característicos, dependiendo de temperatura, humedad y fuentes alimentarias.

La caracterización de la ornamentación del exocorion, el tamaño, la forma y la presencia o ausencia de ciertas estructuras sirven como parámetros para la definición o diferenciación de algunas especies¹⁷. Barata¹³ mostró la importancia de estas estructuras para la diferenciación de 10 especies de Rhodnius, creando una clave dicotómica basada en las características morfológicas de los huevos. Posteriormente, Gonçalves et al.¹⁸, Rosa et al.¹⁶ y Santos-Mallet et al.¹⁰ también destacaron la importancia de estas estructuras en la caracterización de especies del género Triatoma.

T. pintodiasi es una especie críptica con respecto a T. circummaculata y forma parte del subcomplejo de T. rubrovaria, que se compone de otras cinco especies: T. carcavalloi; Triatoma Klugi Carcavallo, Jurberg, Lent & Galvao, 2001; Triatoma Del Ponte, Lima, 1929; Triatoma oliveirai (Neiva, Pinto y Lent, 1939); y T. rubrovaria (Blanchard, 1843).

El perfil morfométrico, obtenido midiendo las dimensiones de los huevos, permitió observar la diferencia de promedios cuando se comparó directamente con los estudios de Rosa et al.¹⁶ y Cardozo-de-Almeida et al¹¹ sobre T. circunmaculata. Sin embargo, en este estudio, no se pudo realizar un análisis estadístico comparativo debido a la ausencia de los datos originales, sin procesar, de los autores citados y la homogeneidad del software, en el cual cualquier análisis aleatorio podría proporcionar un significado falso.

T. pintodiasi presentó similitudes en relación a T. circummaculata en comparación con los estudios de Rosa et al.¹⁶ y Cardozo-de-Almeida et al.¹¹; sin embargo, la configuración exocorial en el primer tercio del borde mostró una morfología diferente entre las especies.

CONCLUSIÓN

La morfología de los huevos de T. pintodiasi se observó, por primera vez, utilizando la técnica de MEB y mostró similitudes estructurales en la configuración exocorial con T. circummaculata, siendo que, la configuración en el primer tercio del borde es una característica importante que puede servir de base para estudios más profundos sobre esas especies.